Protocolo de pipeta serológica de micropipeta Falcon de 15 ml Limpie y seque las placas de vidrio con etanol al 70 %. Prepare el módulo de aplicación de geles de células, asegurándose de que las placas de vidrio estén bien sujetas. Siga la receta del gel de resolución (consulte la Tabla 1 anterior), agregue
La electroforesis en gel de poliacrilamida (PAGE) es una técnica que se utiliza casi universalmente en los laboratorios de ciencias biológicas. El objetivo de esta técnica es separar una muestra mixta de proteínas para identificar y cuantificar proteínas individuales de la mezcla.
Muchas empresas venden acrilamida disuelta en agua o en geles prefabricados. Estos productos son un poco más costosos, pero reducen el riesgo de inhalación de acrilamida. El bromuro de etidio es el colorante de ADN más común disponible; también es tóxico si se inhala.
Me gustaría intentar desgasificar el gel de poliacrilamida 15 minutos antes de la colada, pero no tengo una cámara de vacío ni un aspirador potente para colocar el gel. Creo que es muy posible utilizar un sistema de congelación y descongelación.
Figura 1. Comparación de geles de Tris-glicina (izquierda) y Bis-Tris (derecha). Los geles de Tris-glicina y Bis-Tris se moldearon a mano con 12 % de acrilamida y se dejaron polimerizar durante la noche. Los geles se cargaron con titulaciones idénticas de lisado de E. coli (carriles)
Tinciones con colorante Coomassie. El método más común de detección de proteínas en gel es la tinción con colorante Coomassie. Estas tinciones utilizan la forma G-250 ("coloidal") o la forma R-250 del colorante. Las tinciones con colorante Coomassie coloidal se pueden formular para detectar eficazmente
Volumen sugerido de ~8–10 mL para mini blots y 15 mL para midi blots (0,1 mL de solución de trabajo por cm2 de membrana). InChilete el blot con la solución de trabajo durante 1 min. cuando se utilizan sustratos ECL estándar o 5 min. cuando se utilizan sustratos de alto rendimiento
Si se utilizó un gel de poliacrilamida de 1,0 mm de espesor, fije el gel en TCA. Transfiera la placa de vidrio que contiene el gel a una bandeja que contenga un exceso de 10 % de TCA. Agite o gire suavemente la bandeja durante 10 minutos a temperatura ambiente.
Reivindicamos: 1. Un proceso para producir una solución de poliacrilamida diluida que comprende: (a) proporcionar un gel de poliacrilamida de aproximadamente 6 a aproximadamente 15 % de sólidos poliméricos y que tiene una viscosidad de solución de aproximadamente 3 a aproximadamente 10 cps, medida en una
La electroforesis en gel de poliacrilamida, que originalmente era un método estrictamente analítico, se ha convertido en algunos casos en un método preparativo de alta resolución. Este capítulo se centrará en la elución de proteínas a partir de geles SDS, con énfasis en