Electroforesis en gel de poliacrilamida SDS de proteínas Joseph Sambrook y David W. Russell Este protocolo fue adaptado de "Técnicas comúnmente utilizadas en la clonación molecular", Apéndice 8, en Molecular Cloning, Volumen 3, 3.ª edición (eds.
Geles y tampones para electroforesis de proteínas. La electroforesis en gel de poliacrilamida (PAGE) y la SDS-PAGE son técnicas comunes que se utilizan para la separación de proteínas. Los geles de proteínas se pueden moldear a mano o comprar como geles prefabricados para mayor comodidad. El porcentaje
Para poder identificar proteínas con pesos moleculares entre 20 y 200 kDa, deberá crear un gel SDS-PAGE convencional utilizando las recetas que se muestran a continuación. El porcentaje de gel que necesita corresponde al peso molecular de la proteína objetivo. Disolver compuestos
Por ejemplo, mientras que un gel al 20 % se puede someter a electroforesis a 800 V con pocos problemas, un gel al 8 % en las mismas condiciones probablemente generaría demasiado calor para que el aparato lo disipe. 13. Cuando el oligonucleótido esté suficientemente resuelto, apague el aparato.
Electroforesis en gel de poliacrilamida Nuestros equipos y suministros para geles son de CBS Scientific. El sitio web de National Diagnostics tiene información muy útil sobre los geles de poliacrilamida de ARN/ADN. Vertido del gel Para desnaturalizar los geles de urea, utilizamos SequaGel
Los geles de poliacrilamida se forman mediante la reacción de acrilamida y bis-acrilamida (N,N'-metilenbisacrilamida) que da como resultado una matriz de gel altamente reticulada. El gel actúa como un tamiz a través del cual se mueven las proteínas en respuesta a la electricidad
Preparación de gel de poliacrilamida al 8 % Prepare 10 ml de gel agregando lo siguiente: • 2 ml de bis-acrilamida al 40 % (solución) • 1 ml de tampón TBE 10X • 6,9 ml de dd.H 2O • 100 μl de persulfato de amonio *Ahora asegúrese de que sus placas de gel estén intactas y
gel de apilamiento. El porcentaje de acrilamida en el gel SDS PAGE depende del tamaño de la proteína objetivo en la muestra. (Los detalles se muestran a continuación) Acrilamida % Rango de peso molecular 7 % 50 kDa - 500 kDa 10 % 20 kDa - 300 kDa 12 % 10 kDa - 200 kDa 15 % 3 kDa - 100 kDa
Los geles de poliacrilamida se caracterizan por dos parámetros: concentración total de monómero (%T, en g/100 ml) y porcentaje en peso de reticulante (%C). Al variar estos dos parámetros, se puede optimizar el tamaño de poro del gel para obtener el mejor rendimiento
Electroforesis de proteínas en gel de poliacrilamida nativa y SDS Suministros y reactivos Soluciones de acrilamida (consulte la Tabla 1 y la Tabla 2 para ver las recetas) Las soluciones madre premezcladas están disponibles comercialmente (por ejemplo, Invitrogen) Solución madre de persulfato de amonio